Вход – Меркурий ХС 11 Подготовка к микробиологическим исследованиям
11.1 Общие положения
Общие положения по подготовке к микробиологическим исследованиям – по ГОСТ ISO 7218.
11.2 Средства измерений, оборудование, материалы, реактивы, растворы и питательные среды
11.2.1 При подготовке к микробиологическим анализам применяют средства измерений, оборудование, материалы, реактивы, растворы и питательные среды по ГОСТ 7702.2.7, ГОСТ 7702.2.6, ГОСТ 31467, ГОСТ 31468, а также следующие.
Автоклав по ГОСТ ISO 7218.
Весы лабораторные по ГОСТ ISO 7218, ГОСТ OIML R 76-1.
Дозатор для розлива питательных сред и реактивов по ГОСТ ISO 7218.
Колбы по ГОСТ 25336.
Кружка по ГОСТ 9147.
Ламинарный шкаф класса биологической безопасности II.
Лампы бактерицидные (1, 5 – 2, 5 Вт на 1 м3 воздуха).
Лупа по ГОСТ 25706.
Магнитные мешалки с подогревом до 300°С.
Материалы для упаковки посуды при стерилизации.
Пинцеты медицинские по ГОСТ 21241.
Пипетки градуированные по ГОСТ 29227, ГОСТ 29228.
Пробирки с поплавками (трубки Дархема).
Пробирки по ГОСТ 25336.
Пипетки автоматические вместимостью 10, 2, 1 см3 по ГОСТ 29227.
Посуда одноразовая для микробиологических исследований.
Печь микроволновую для расплавления питательных сред по ГОСТ ISO 7218.
Прибор для подсчета колоний по ГОСТ ISO 7218.
рН-метр с точностью калибровки ±0, 1 ед. рН при температуре от 20°С до 25°С по ГОСТ ISO 7218.
Скальпели и ножи медицинские по ГОСТ 21240.
Спиртовка по ГОСТ 25336.
Стаканы по ГОСТ 25336.
Стекла предметные по ГОСТ 9284.
Стекла покровные по ГОСТ 6672.
Стерилизационный сушильный шкаф для температурного режима (180±0, 5)°С по ГОСТ ISO 7218.
Ступка по ГОСТ 9147.
Термометры жидкостные стеклянные с диапазоном температуры от 0°С до 50°С и от 50°С до 100°С по ГОСТ 28498.
Термостаты электрические для выращивания микроорганизмов с автоматическим терморегулятором, обеспечивающие поддержание температуры от 20°С до 55°С по ГОСТ ISO 7218.
Флаконы из темного стекла с притертой пробкой.
Холодильник или холодильная камера по ГОСТ ISO 7218.
Часы механические с сигнальным устройством по ГОСТ 3145.
Чашки Петри стеклянные по ГОСТ 25336.
Бумага оберточная по ГОСТ 8273.
Пробки силиконовые, резиновые.
Пеналы для стерилизации лабораторной посуды.
Пакеты бумажные самоклеящиеся с индикаторами для паровой и воздушной стерилизации (для упаковывания изделий медицинского назначения перед стерилизацией).
Материал пластиковый без складок с индикаторами для паровой и воздушной стерилизации (для упаковывания изделий медицинского назначения перед стерилизацией).
Аппарат термосварочный ротационного или импульсного типа для запечатывания упаковок для стерилизации.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
Вата медицинская гигроскопическая по ГОСТ 5556.
Марля медицинская по ГОСТ 9412.
Агар микробиологический по ГОСТ 17206.
Агар сухой питательный.
Азид натрия (NaN3).
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Глицерин дистиллированный по ГОСТ 6824.
D-Глюкоза по ГОСТ 6038.
Дрожжи хлебопекарные прессованные по ГОСТ 171.
Желатин по ГОСТ 11293.
Железо (II) аммония сульфат (соль Мора) (NH4)2SO4·FeSO4·6H2O.
Железо (III) аммония сульфат.
Железо треххлористое 6-водное по ГОСТ 4147.
Железо (III) цитрат.
Железо (II) сернокислое 7-водное по ГОСТ 4148.
Желчь крупного рогатого скота натуральная или сухая.
Йод по ГОСТ 4159.
Калия гидрат окиси технический по ГОСТ 9285.
Калий йодистый по ГОСТ 4232.
Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный по ГОСТ 2493.
Калий фосфорнокислый двузамещенный безводный.
Калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198.
Кальций углекислый по ГОСТ 4530.
Кислота карболовая кристаллическая (фенол).
Кислота розоловая, ч.д.а.
Кислота соляная по ГОСТ 3118.
Кислота щавелевая по ГОСТ 22180.
Хлорид лития 6-водный.
Магний хлористый 6-водный по ГОСТ 4209.
Масло вазелиновое медицинское по ГОСТ 3164.
Метиленовый синий (голубой).
Карбамид (мочевина) по ГОСТ 6691.
Мясо – говядина охлажденная по ГОСТ 31797.
Натрия гидроокись, раствор молярной концентрацией 1, 0 моль/дм3 (фиксанал).
Натрия гидроокись, раствор молярной концентрацией 0, 1 моль/дм3 (фиксанал).
Натр едкий очищенный по ГОСТ 11078.
Натрий углекислый кислый по ГОСТ 4201.
Натрий кислый селенистокислый.
Натрий серноватистокислый (тиосульфат натрия, гипосульфит натрия) по ГОСТ 27068, ч.д.а.
Натрий углекислый (карбонат).
Натрий фосфорнокислый двузамещенный по ГОСТ 11773.
Натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-водный по ГОСТ 245.
Натрий хлористый по ГОСТ 4233.
Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по ГОСТ 13805.
Плазма кроличья сухая.
Сахароза по ГОСТ 5833.
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.
Толуол по ГОСТ 5789.
DL-аминокислоты (лизин, орнитин, аргинин).
L-аминокислоты (лизин, орнитин, аргинин),
Яйца куриные по ГОСТ 31654.
Водный раствор метиленового синего (голубого) массовой концентрацией 0, 1%.
Раствор карболовый кристаллического фиолетового или генциан фиолетового.
Раствор карболовый фуксина Циля.
Раствор серноватистокислого натрия (тиосульфата, гипосульфита).
Раствор розоловой кислоты массовой концентрацией 5, 0%.
Раствор индикатора бромтимолового синего.
Раствор индикатора Андреде.
Раствор фенолового красного массовой концентрацией 1, 6%.
Раствор фенолового красного массовой концентрацией 0, 4%.
Раствор бриллиантового зеленого массовой концентрацией 0, 001%.
Раствор бриллиантового зеленого массовой концентрацией 0, 5%.
Раствор малахитового зеленого массовой концентрацией 1, 0%.
Раствор трифенилтетразолиума хлористого массовой концентрацией 0, 4%.
Раствор натрия кислого селенистокислого массовой концентрацией 10, 0%.
Раствор мочевины массовой концентрацией 40, 0%.
Раствор мочевины массовой концентрацией 20, 0%.
Раствор метилового красного.
Раствор гидрата окиси калия массовой концентрацией 40, 0%.
Раствор щавелевой кислоты массовой концентрацией 12, 0%.
Раствор железа треххлористого 6-водного массовой концентрацией 8, 0%.
Реактив Эрлиха. Реактив Ковача по ГОСТ 31659.
β-галактозидный реактив по ГОСТ 31659.
Реактивы для теста Григорсена по ГОСТ 31747.
Спирто-водный раствор фуксина Пфейфера.
Спиртовой раствор α-нафтола.
Физиологический фосфат-буферный раствор.
Бумага индикаторная для обнаружения индола.
Бумага индикаторная для определения сероводорода.
Красящие бумажки с кристаллическим фиолетовым или генциан фиолетовым для окраски по Граму.
Растворы и реактивы для окрашивания по Граму и для выявления спор – по ГОСТ 10444.1, ГОСТ 30425, ГОСТ ISO 7218.
Реактивы для реакции Фогес-Проскауера по ГОСТ 31659.
Калий гидрофосфатный безводный.
Диски с углеводами для тестов на ферментацию сахаров, по прилагаемой к ним инструкции.
Диски индикаторные бумажные для определения оксидазы.
Диск для биохимического подтверждения сальмонелл.
Диск для подтверждения St. aureus.
Сухие агглютинирующие адсорбированные поливалентные сальмонелезные О-сыворотки основных групп А, В, С, Д, Е и редких групп; Vi-, Н-агглютинирующие сыворотки по прилагаемой к ним инструкции.
Системы биохимических микротестов по прилагаемой к ним инструкции. Биохимические микротесты со специальной адаптированной базой данных ГОСТ 31468.
Водорода пероксид по ГОСТ 10929 массовой концентрацией 30 г/дм3.
Сухой или жидкий панкреатический гидролизат казеина.
Сусло-агар по ГОСТ 27543.
Среда Сабуро по ГОСТ 10444.12.
Агар яично-желточный азидный.
Агар с мочевиной (Кристенсена).
Агар трехсахарный по Олькеницкому.
Агар с феноловым красным и бриллиантовым зеленым.
Агар усиленный для клостридий.
Агар триптононно-сульфитный с неомицином.
Бульон Хоттингера по ГОСТ 10444.1.
Бриллиантовый зеленый лактозный желчный бульон по ГОСТ 31747.
Забуференная пептонная вода.
Забуференная пептонная вода готовая жидкая стерильная.
Забуференная пептонная вода сухая.
Мясо-пептонный бульон с 1% глюкозы.
Мясо-пептонный агар с глюкозой.
Мясо-пептонный агар с глюкозой и дрожжевым экстрактом.
Питательная среда для выявления сальмонелл.
Селенитовая среда Лейфсона.
Среды Гисса с углеводами.
Среда Вильсон-Блера (агаризованная), измененная для анаэробов.
Среда Кларка для реакции Фогес-Проскауэра.
Агаризованная среда Байрд-Паркера по ГОСТ 31746.
Среда для расщепления фенилаланина.
Среды с аминокислотами (лизином, орнитином, аргинином).
Среда Кесслера (с лактозой).
Селенит-цистиновый накопительный бульон.
Магниевая или хлористомагниевая среда.
Среда из сухого питательного агара с глюкозой.
Среда с углеводом (маннитом или мальтозой) и феноловым красным.
Среда Хейфеца с лактозой.
Среда Раппапорта-Вассилиадиса с соей (RVS-бульон) по ГОСТ 31659.
Среда Раппапорта-Вассилиадиса (R-V R10).
Тетратионатный бульон Мюллера-Кауфмана по ГОСТ 31659.
Агаризованная среда с кроличьей плазмой и бычьим фибриногеном по ГОСТ 31746.
Готовая питательная среда с растворами теллурита калия, сульфамезатина и эмульсии яичного желтка по ГОСТ 31746.
ГРМ агар (сухой питательный агар для культивирования микроорганизмов на основе гидролизата рыбной муки) по ГОСТ 31746.
Модифицированная полужидкая среда по инструкции на этикетке.
Висмут-сульфитный агар по инструкции на этикетке.
Среда Плоскирева по инструкции на этикетке.
Среда готовая на тест-пластине (например, Petrifilm®**).
Среда Левина по инструкции на этикетке.
Среда Клиглера по ГОСТ 31659.
Среда SIM для идентификации по инструкции на этикетке.
Среда для реакции Фогес-Проскауера по ГОСТ 31659.
Триптон-триптофановая среда по ГОСТ 31659.
L-лизиндекарбоксилазная среда по ГОСТ 31659.
ONPG-диски для определения β-галактозидазной активности по инструкции на этикетке.
Модифицированная полужидкая среда MSRV по инструкции на этикетке.
Бриллиантово-зеленый агар по инструкции на этикетке.
XLD-4 агар по инструкции на этикетке.
VР-среда по ГОСТ 31659.
Агар тройной сахарный по инструкции на этикетке.
Агар с цитратом железа (Симмонса) по инструкции на этикетке.
Агар Кристенсена с мочевиной по ГОСТ 31659.
Агар Байрд-Паркера по ГОСТ 31746.
Агар тройной сахарный с цитратом железа по инструкции на этикетке.
Агар лактозный с бриллиантовым зеленым и феноловым красным по ГОСТ 31747.
Глюкозо-триптонный (агар) бульон по ГОСТ 10444.1.
Кристалл виолет нейтральный красный желчный лактозный агар (VRBL-arap).
Трехсахарный железистый агар (TSI-arap) по ГОСТ 31746.
Скошенный столбик агара с цитратом (Симмонса).
Скошенный столбик мясо-пептонного агара.
Селективная обогатительная среда (лаурил сульфат триптозный бульон) по ГОСТ 31747.
Селективная обогатительная среда (бульон Мак-Конки) по ГОСТ 31747.
Система для культивирования анаэробных микроорганизмов и капнофильных бактерий (например, FnoxomatTM**).
Диагностикум латексный для серотипирования бактерий рода Salmonella по документу, действующему на территории государства, принявшего стандарт.
Набор для подтверждения идентификации бактерий рода Salmonella с помощью латекс-теста по документу, действующему на территории государства, принявшего стандарт.
Тест-наборы для биохимической идентификации бактерий рода Salmonella.
Тест-штампы бактерий рода Salmonella, не относящихся к тифозной группе.
11.2.2 Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками, а также материалов, реактивов, растворов и питательных сред по качеству не ниже указанных.
Допускается использование аналогичных готовых и сухих (дегидратированных), питательных сред, предназначенных для указанных целей.
11.2.3 Подготовка посуды и материалов – по ГОСТ ISO 7218.
11.2.4 Подготовку исходной суспензии и приготовление десятикратных разведений для микробиологических исследований проводят по документу, действующему на территории государства, принявшего стандарт***.
11.3 Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов, разведений и питательных сред в лаборатории
11.3.1 Общие положения по обеспечению качества приготовления питательных сред в лаборатории, сроки и условия их хранения – по ГОСТ ISO/TS 11133-1, ГОСТ ISO 11133-2.
11.3.2 Приготовление растворов индикаторов – по ГОСТ 4919.1.
11.3.3 Приготовление разведений – по ГОСТ ISO 7218, ГОСТ 26669.
11.3.4 Раствор Люголя
2 г калия йодистого растворяют в 5 – 10 см3 дистиллированной воды в мерной колбе объемом 300 см3, прибавляют 1 г кристаллического йода, оставляют на несколько часов до полного его растворения, затем доводят объем раствора дистиллированной водой до метки.
11.3.5 Раствор серноватистокислого натрия (тиосульфата, гипосульфита)
5 г ч.д.а. серноватистокислого натрия кристаллического (тиосульфата, гипосульфита) растворяют в 5 – 1 см3 дистиллированной воды, затем доводят объем раствора дистиллированной водой до 100 см3 и стерилизуют кипячением в течение 30 мин.
11.3.6 Физиологический раствор
В 1000 см3 дистиллированной воды растворяют 8, 5 г хлористого натрия. Стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение 20 мин.
11.3.7 Реактив Эрлиха
В 50 см3 этилового спирта массовой долей 96, 0% растворяют 4, 0 г парадиметиламинобензальдегида, затем медленно добавляют 50 см3 концентрированной соляной кислоты.
Реактив хранят во флаконе из темного стекла с притертой пробкой при температуре (4 – 8)°С.
11.3.8 Раствор розоловой кислоты массовой концентрацией 5, 0%
0, 5 г розоловой кислоты всыпают во флакон из темного стекла с притертой пробкой и заливают 10 см3 этилового ректификованного спирта массовой концентрацией 96, 0%. Через 24 ч раствор готов к употреблению, раствором можно пользоваться в течение месяца.
Раствор хранят во флаконе из темного стекла с притертой пробкой при температуре 4°С – 8°С.
11.3.9 Водный раствор метиленового синего (голубого) массовой концентрацией 0, 1%
0, 1 г метиленового синего (голубого) всыпают во флакон из темного стекла с притертой пробкой и заливают 100 см3 дистиллированной воды, ставят на сутки в термостат при температуре (37±0, 5)°С.
11.3.10 Раствор индикатора бромтимолового синего
0, 4 г бромтимолового синего растворяют в 40 см3 дистиллированной воды, нагревая ее до кипения. После этого к раствору прибавляют 6, 4 см3 раствора гидроокиси натрия молярной концентрацией 0, 1 моль/дм3, в результате чего жидкость приобретает зеленоватый цвет, и доливают дистиллированной водой до 100 см3.
Индикатор следует хранить во флаконе с притертой пробкой в темном месте.
11.3.11 Раствор индикатора Андреде
0, 5 г кислого фуксина растворяют в 100 см3 дистиллированной воды, прибавляют 16, 4 см3 раствора гидроокиси натрия молярной концентрацией 1, 0 моль/дм3. Стерилизуют 5 мин при температуре (100±1)°С.
Индикатор должен иметь соломенно-желтый цвет.
Раствор индикатора Андреде хранят в темном флаконе с притертой пробкой, в темном месте.
11.3.12 Раствор фенолового красного массовой концентрацией 1, 6%
1, 6 г фенолового красного помещают в мерную колбу на 100 см3, растворяют в дистиллированной воде, добавляя ее до метки 100 см3.
11.3.13 Раствор фенолового красного массовой концентрацией 0, 4%
0, 4 г фенолового красного помещают в мерную колбу на 100 см3, растворяют в дистиллированной воде, добавляя ее до метки 100 см3.
11.3.14 Раствор бриллиантового зеленого массовой концентрацией 0, 001%
1, 0 г бриллиантового зеленого помещают в мерную колбу на 100 см3. В колбу добавляют до метки 100 см3 этиловый ректификованный спирт с массовой долей 96, 0%, растворяют и настаивают в течение 24 ч. К 10 см3 полученного 1, 0%-ного спиртового раствора добавляют до 90 см3 дистиллированной воды, тщательно взбалтывают.
Раствор хранят во флаконе из темного стекла с притертой пробкой при комнатной температуре не более 3 мес.
11.3.15 Раствор бриллиантового зеленого массовой концентрацией 0, 5%
0, 5 г бриллиантового зеленого помещают в фарфоровую ступку и, постепенно растирая, растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу на 100 см3 и доводят дистиллированной водой до метки 100 см3.
11.3.16 Карболовый раствор кристаллического фиолетового или генциан фиолетового
1 г кристаллического фиолетового или генциан фиолетового растирают в фарфоровой ступке с 2, 0 г кристаллической карболовой кислоты (фенола). Во время растирания небольшими порциями добавляют 10 см3 этилового ректификованного спирта массовой концентрацией 96, 0%. Раствор переливают в мерную колбу на 100 см3 и доводят дистиллированной водой до метки 100 см3. Раствор фильтруют через влажный бумажный фильтр.
Растворы генциан фиолетового или кристаллического фиолетового нестойки. Готовят перед употреблением.
11.3.17 Карболовый раствор фуксина Циля
1 г порошка фуксина основного растирают в ступке с 5 г кристаллической карболовой кислоты и 0, 5 см3 (несколько капель) глицерина. Во время растирания небольшими порциями прибавляют 10 см3 этилового ректификованного спирта массовой концентрацией 96, 0%. После полного растирания к смеси прибавляют при постоянном помешивании 100 см3 дистиллированной воды и выдерживают 2 сут, после чего фильтруют через бумажный фильтр.
Фуксин Циля хранят во флаконе из темного стекла с притертой пробкой.
11.3.18 Спирто-водный раствор фуксина Пфейфера
К одной части карболового раствора фуксина Циля (см. 11.3.17) приливают девять частей дистиллированной воды. Раствор нестойкий.
Готовят перед использованием.
11.3.19 Раствор малахитового зеленого массовой концентрацией 1, 0%
1 г малахитового зеленого засыпают во флакон из темного стекла с притертой пробкой и заливают 100 см3 этилового ректификованного спирта массовой концентрацией 96, 0%. Через 24 ч раствор готов к употреблению.
11.3.20 Раствор трифенилтетразолиума хлористого массовой концентрацией 0, 4%
0, 4 г трифенилтетразолиума хлористого засыпают во флакон из темного стекла с притертой пробкой и заливают 100 см3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают до полного растворения.
11.3.21 Раствор натрия кислого селенистокислого массовой концентрацией 10, 0%
10 г натрия кислого селенистокислого (гидроселенит) помещают в стерильную мерную колбу объемом 100 см3 и добавляют до метки 100 см3 стерильную дистиллированную воду, тщательно перемешивают до полного растворения.
Раствор готовят перед употреблением.
11.3.22 Раствор L-цистина
0, 1 г L-цистина, 15 см3 раствора гидроокиси натрия массовой долей 1 моль/дм3 помещают в стерильную мерную колбу объемом 100 см3 и стерильной дистиллированной водой доводят до метки 100 см3, тщательно перемешивают до полного растворения.
Раствор стерилизации не подлежит.
11.3.23 Дрожжевой экстракт
100 г измельченных хлебопекарных прессованных дрожжей заливают 1000 см3 дистиллированной воды, кипятят при постоянном перемешивании до тех пор, пока не сойдет пена, и помещают на 24 ч при 4°С – 8°С в холодильник. Затем эмульсию фильтруют через вату и фильтрат стерилизуют в течение 20 мин при температуре (121±1)°С.
5 см3 жидкого дрожжевого экстракта равноценны 1 г дрожжевого экстракта в порошке.
Дрожжевой экстракт из сухих дрожжей готовят по инструкции изготовителя.
11.3.24 Желточная эмульсия
Для приготовления желточной эмульсии на дно стерильной чашки Петри помещают куриное яйцо, тщательно протирают его ватой, смоченной этиловым ректификованным спиртом, и обжигают. Стерильным пинцетом пробивают с двух противоположных сторон яйца два отверстия, через одно из этих отверстий из яйца полностью удаляют белок, а затем, несколько увеличив отверстие, выливают желток в стерильную колбу вместимостью 200 см3. К желтку постепенно добавляют (частями по 20 – 30 см3) 150 – 200 см3 (в зависимости от размера яйца) стерильного физиологического раствора, содержимое тщательно встряхивают (гомогенизируют) до получения гомогенной массы.
Готовят перед применением.
11.3.25 Раствор мочевины массовой концентрацией 40, 0%
40 г карбамида (мочевины) помещают в мерную колбу объемом 100 см3 и добавляют стерильную дистиллированную воду до метки 100 см3, тщательно перемешивают до полного растворения. Стерилизуют фильтрацией через фильтр Зейтца. Допускается “самостерилизация” раствора мочевины путем выдерживания его при комнатной температуре в течение 2 – 3 сут. Проверяют стерильность раствора контрольным посевом.
11.3.26 Раствор метилового красного
0, 1 г метилового красного помещают в мерную колбу объемом 500 см3 и добавляют в 300 см3 этилового ректификованного спирта массовой концентрацией 96, 0%, тщательно перемешивают до полного растворения и добавляют дистиллированную воду до метки 500 см3. Раствор хранят во флаконе из темного стекла с притертой пробкой.
11.3.27 Спиртовой раствор α-нафтола массовой долей 60 г/дм3
6 г α-нафтола растворяют в 100 см3 этилового ректификованного спирта массовой концентрацией 96, 0%.
11.3.28 Раствор калия гидрат окиси массовой концентрацией 40, 0%
40 г калия гидрат окиси помещают в мерную колбу объемом 100 см3 и добавляют стерильную дистиллированную воду до метки 100 см3, тщательно перемешивают до полного растворения.
11.3.29 Раствор щавелевой кислоты массовой концентрацией 12, 0%
12 г щавелевой кислоты помещают в мерную колбу объемом 100 см3 и добавляют стерильную дистиллированную воду до метки 100 см3, тщательно перемешивают до полного растворения.
11.3.30 Раствор железа треххлористого 6-водного с массовой концентрацией 8, 0%
8, 0 г железа треххлористого 6-водного переносят в мерную колбу объемом 100 см3, добавляют дистиллированную воду до метки 100 см3, тщательно перемешивают до полного растворения.
11.3.31 Физиологический фосфат-буферный раствор
8, 5 г натрия хлористого 0, 45 г калия фосфорнокислого двузамещенного безводного, 5, 34 г натрия фосфорнокислого однозамещенного 2-водного помещают в мерную колбу объемом 1000 см3 доливают до метки 1000 см3 дистиллированной водой, стерилизуют 30 мин при температуре (121±1)°С.
11.3.32 Плазма крови кроличья
Плазму крови кроличью сухую восстанавливают по инструкции изготовителя.
11.3.33 Раствор мочевины массовой концентрацией 20, 0%
20 г карбамида (мочевины) переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, добавляют стерильную дистиллированную воду до метки 100 см3, тщательно перемешивают до полного растворения.
11.3.34 Бумага индикаторная для определения сероводорода
20 г ацетата свинца, 1 г натрия углекислого (карбоната) растворяют в 100 см3 дистиллированной воды. Раствором пропитывают фильтровальную бумагу, высушивают ее при температуре 18°С – 25°С и нарезают на узкие полоски. После приготовления бумага остается белой, при наличии сероводорода чернеет.
Бумагу индикаторную хранят во флаконе из темного стекла с притертой пробкой.
11.3.35 Бумага индикаторная для обнаружения индола
Листы фильтровальной бумаги обильно смачивают горячим раствором щавелевой кислоты массовой концентрацией 12, 0% (11.3.29), высушивают при температуре 18°С – 25°С, нарезают полосками шириной 0, 2 – 0, 4 см, длиной 5, 0 – 6, 0 см.
11.3.36 Красящие бумажки с кристаллическим фиолетовым или генциан фиолетовым для окраски по Граму в модификации Синева
1 г кристаллического фиолетового или генциан фиолетового, 100 см3 этилового ректификованного спирта массовой концентрацией 96, 0% и 5 см3 глицерина смешивают, наливают в лоток. Фильтровальную бумагу нарезают в виде полосок шириной 1 – 2 см и длиной 30 – 50 см. Полоски погружают на не сколько секунд в лоток с приготовленным раствором так, чтобы смачивались обе их поверхности. Окрашенные полоски вынимают пинцетом, дают раствору стечь и подвешивают для высушивания. Бумагу сушат в термостате при температуре (37±1)°С. Высушенные полоски бумаги разрезают на кусочки размерами 2×2 см или 2, 0×4, 5 см. Хранят во флаконе из темного стекла с притертой пробкой.
11.3.37 Мясная вода
Охлажденную говядину освобождают от костей, сухожилий, жира, измельчают. 1, 0 кг полученного фарша заливают двух- или четырехкратным количеством питьевой воды (по массе), медленно нагревают до кипения и кипятят в течение 1, 5 ч, постоянно помешивая и удаляя накипь. После кипячения мясную воду остужают, удаляют жир. Жидкость фильтруют через вату, затем через фильтровальную бумагу до полной прозрачности. Фильтрат измеряют и доливают до первоначального объема кипяченой питьевой водой, затем разливают по флаконам и стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение 30 мин.
11.3.38 Мясо-пептонный бульон, мясо-пептонный бульон с глюкозой
10 г пептона бактериологического, 5 г натрия хлористого (хлорид) добавляют к 1000 см3 мясной воды (см. 11.3.37) устанавливают рН (7, 0 – 7, 2) ед. рН, кипятят. Жидкость фильтруют через фильтровальную бумагу, разливают по бутылям.
Мясо-пептонный бульон с глюкозой: к 1000 см3 мясо-пептонного бульона перед стерилизацией добавляют 1, 0 или 10, 0 г глюкозы, устанавливают рН (7, 0 – 7, 2) ед. рН и стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение 20 мин.
11.3.39 Амино-пептидный бульон
В 250 см3 жидкого аминопептида добавляют 5, 5 г натрия хлористого (хлорид), 750 см3 дистиллированной воды, перемешивают, стерилизуют в течение 20 мин при температуре (121±1)°С. Срок хранения при температуре (4 – 8)°С не ограничен.
11.3.40 Пептонная вода
В 1000 см3 дистиллированной воды при медленном нагревании растворяют 1 г пептона бактериологического. Полученный раствор при необходимости фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают рН (7, 0 – 7, 2) ед. рН, и стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение 30 мин.
11.3.41 Забуференная пептонная вода
В 1000 см3 воды дистиллированной при медленном нагревании растворяют 10 г пептона и 5 г натрия хлористого (хлорид), 9 г фосфорнокислого двузамещенного натрия, 1, 5 г фосфорнокислого однозамещенного калия, устанавливают рН (7, 0 – 7, 2) ед. рН и стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение 15 мин.
11.3.42 Пептонно-солевой раствор
В 1000 см3 дистиллированной воды при медленном нагревании растворяют 1 г пептона бактериологического, 8, 5 г хлористого натрия (хлорид). Полученный раствор при необходимости фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают рН (7, 0 – 7, 2) ед. рН.
Раствор хранят в темном месте при температуре (4±2)°С не более одного месяца.
11.3.43 Голодный агар
2 г агара микробиологического растворяют в 98 см3 дистиллированной воды при нагревании и постоянном помешивании до полного растворения, устанавливают рН (7, 0 – 7, 2) ед. рН.
11.3.44 Мясо-пептонный агар
В 1000 см3 мясо-пептонного бульона (11.3.38) добавляют 15 – 20 г агара микробиологического и кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения агара, устанавливают рН (7, 0 – 7, 2) ед. рН.
11.3.45 Мясо-пептонный агар с глюкозой
К 1000 см3 мясо-пептонного агара (11.4.44) перед стерилизацией добавляют 1 или 10 г глюкозы, устанавливают рН (7, 0 – 7, 2) ед. рН.
11.3.46 Мясо-пептонный агар с глюкозой и дрожжевым экстрактом
К 1000 см3 стерильного расплавленного и охлажденного до температуры 50°С мясо-пептонного агара с глюкозой (11.3.45) перед применением асептически добавляют 2 г дрожжевого экстракта (11.3.23).
11.3.47 Среда Кесслера (с лактозой)
10 г пептона бактериологического, 5 г сухой желчи или 50 см3 натуральной стерильной желчи, 2, 5 г лактозы, 0, 01 г генциан фиолетового добавляют в 1000 см3 дистиллированной воды. Тщательно перемешивают, кипятят в течение 20 – 30 мин. Фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (7, 3±0, 2) ед. рН при температуре (25±1)°С. Разливают в пробирки с поплавками (трубки Дархема) дном вверх.
Стерилизуют в течение 20 мин при температуре (114±1)°С. Если в поплавках остался воздух, среду не используют. Цвет готовой среды фиолетовый.
Срок хранения – не более 14 сут при температуре (4±1)°С.
11.3.48 Среда Хейфеца (с лактозой)
10 г пептона бактериологического, 5 г натрия хлористого (хлорида), 5 г лактозы растворяют в 1000 см3 дистиллированной воды, устанавливают рН (7, 4 – 7, 6) ед. рН, нагревают до кипения, фильтруют, добавляют 1 см3 5, 0%-ного спиртового раствора розоловой кислоты (11.3.8) и 2, 5 см3 0, 1%-ного водного раствора метиленового синего (голубого) (11.3.9). Среду разливают по 10 см3 в стерильные пробирки с поплавками (трубки Дархема). Стерилизуют при температуре (112±1)°С в течение 20 мин. Цвет среды красно-фиолетовый. Если в поплавках остался воздух, среду не используют.
Срок хранения среды – не более 14 сут при температуре (4±2)°С.
11.3.49 Среда с углеводом (маннитом или мальтозой) и феноловым красным
К 1000 см3 стерильного, расплавленного и охлажденного до (80±2)°С питательного или мясо-пептонного агара (11.3.44) добавляют 10 г углеводов (маннита или мальтозы) (предварительно углеводы растворяют в небольшом объеме стерильной дистиллированной воды) и 52 см3 1, 6%-ного водного раствора фенолового красного (11.3.12). Смесь перемешивают, при необходимости еще раз расплавляют готовую среду, разливают в стерильные чашки Петри и подсушивают. Среду готовят с соблюдением стерильности.
Среда пурпурно-красного цвета.
Срок хранения среды – не более 30 сут при температуре (4±2)°С.
11.3.50 Среды Гисса с углеводами с индикатором Андреде
К 1000 см3 дистиллированной воды прибавляют 10 г пептона сухого ферментативного для бактериологических целей, 5, 0 г натрия хлористого (хлорид). Пептон и соль растворяют при нагревании воды в течение нескольких минут. Фильтруют через бумажный фильтр до прозрачности раствора, устанавливают рН (7, 1±0, 1) ед. рН, прибавляют 10 г одного из необходимых углеводов (лактоза, глюкоза, сахароза, маннит и т.д.) и 10 см3 раствора индикатора Андреде (11.3.11). Среду разливают по 10, 0 см3 в стерильные пробирки с поплавками (трубки Дархема) дном вверх и стерилизуют в течение 20 мин при температуре (112±1)°С.
Среды Гисса с индикатором Андреде должны быть бесцветны или соломенно-желтого цвета без розового оттенка.
11.3.51 Среда Ресселя
К 1000 см3 2, 0%-ного питательного или мясо-пептонного агара (11.3.44) прибавляют 10 г лактозы, 1 г глюкозы и 10 см3 раствора индикатора Андреде (11.3.11).
Среду разливают по 10 см3 в пробирки, стерилизуют при температуре (112±1)°С в течение 20 мин и скашивают так, чтобы на 2, 0 – 3, 0 см от дна пробирки агар оставался в виде столбика.
Готовая среда бледно-розового цвета.
11.3.52 Среда Мюллера
2, 5 г стерильного кальция углекислого помещают в стерильный флакон, добавляют 90 см3 бульона Хоттингера, приготовленного по ГОСТ 10444.1, стерилизуют в течение 30 мин при температуре (121±1)°С, рН готовой среды (7, 2 – 7, 4) ед. рН.
Перед использованием с соблюдением правил асептики добавляют 2 см3 раствора Люголя (11.3.4), и 10 см3 раствора серноватистокислого натрия (тиосульфата) (11.3.5). Готовая среда стерилизации не подлежит.
11.3.53 Среда Кауфмана
В 100 см3 стерильной среды Мюллера (11.3.52), с соблюдением правил асептики, добавляют 1 см3 раствора бриллиантового зеленого массовой концентрацией 0, 001% (11.3.14) и 5 см3 стерильной натуральной говяжьей желчи, перемешивают. Среда стерилизации не подлежит.
Срок хранения среды – не более семи суток при температуре (4±2)°С.
11.3.54 Селенитовая среда
Основа среды: 5 г пептона сухого ферментативного для бактериологических целей или триптона, 4 г лактозы, 7 г натрия фосфорнокислого двузамещенного безводного и 3 г натрия фосфорнокислого однозамещенного при нагревании растворяют в 1000 см3 дистиллированной воды.
Устанавливают рН (7, 0±0, 1) ед. рН путем изменения соотношения солей: натрия фосфорнокислого однозамещенного и натрия фосфорнокислого двузамещенного. Разливают в колбы, стерилизуют в течение 30 мин при температуре (112±1)°С.
Срок хранения среды – не более 2 мес при температуре (4±2)°С.
Для приготовления основы среды допускается вместо пептона или триптона и дистиллированной воды использовать амино-пептидный бульон (11.3.39).
Перед использованием к 960 см3 основы среды добавляют 40 см3 раствора натрия кислого селенистокислого (11.3.21).
Готовую смесь не стерилизуют. Хранению не подлежит.
11.3.55 Селенитово-цистиновая среда
В 1000 см3 готовой селенитовой среды (11.3.54) асептически добавляют 10 см3 раствора L-цистина (11.3.22). Устанавливают рН (7, 0±0, 1) ед. рН.
Среда хранению не подлежит.
11.3.56 Питательная среда для выявления сальмонелл
Состав питательной среды: 4, 3 г питательного агара, 0, 3 г калия фосфорнокислого двузамещенного 3-водного, 1, 5 г лактозы, 1, 5 г сахарозы, 10 см3 стерильной натуральной желчи крупного рогатого скота (или 1 г сухой стерильной желчи), 0, 3 см3 раствора малахитового зеленого массовой концентрацией 1, 0% (11.3.19), 0, 75 см3 раствора трифенилтетразолиума хлористого массовой концентрацией 0, 4% (11.3.20), ингредиенты которого растворяют в 80 см3 дистиллированной воды при подогреве, последовательно, после полного растворения предыдущего ингредиента, доводят до кипения, доливают дистиллированной водой до 100 см3, устанавливают рН (7, 1±0, 1) ед. рН. Стерилизуют в течение 15 мин при температуре (100±1)°С.
11.3.57 Магниевая среда или хлористомагниевая среда
Среду готовят из трех растворов.
4, 2 г пептона сухого ферментативного для бактериологических целей, 7, 15 г натрия хлористого (хлорид), 1, 48 г калия фосфорнокислого двузамещенного безводного, 9 см3 дрожжевого экстракта (11.3.23) (или дрожжевого диализата) растворяют в 890 см3 дистиллированной воды.
35, 7 г магния хлорида растворяют в 90 см3 дистиллированной воды.
0, 9 см3 0, 5%-ного водного раствора бриллиантового зеленого (11.3.15).
Все три приготовленных раствора смешивают, разливают в колбы, флаконы, пробирки. Стерилизуют при температуре (112±1)°С в течение 30 мин.
Срок хранения готовой среды – не более 14 сут при температуре (4±1)°С.
11.3.58 Агар трехсахарный по Олькеницкому
25 г сухого питательного агара, 10 г лактозы, 10 г сахарозы, 1 г глюкозы, 0, 2 г железа (II) аммония сульфат (соль Мора), 10 г мочевины, 4 см3, 4%-ного раствора фенолового красного (11.3.13) растворяют в 1000 см3 дистиллированной воды.
Предварительно соли растворяют в небольшом объеме дистиллированной воды. Углеводы и мочевину также растворяют в небольших объемах воды при подогревании в водяной бане.
Сухой питательный агар расплавляют при нагревании в оставшемся объеме воды.
Все ингредиенты соединяют, перемешивают с расплавленным агаром, фильтруют через марлевый фильтр, устанавливают рН (7, 2 – 7, 4) ед. рН, добавляют индикатор и разливают в пробирки по 6 – 7 см3.
Среду стерилизуют текучим паром три дня подряд по 20 мин при температуре (11±51)°С и скашивают, оставляя столбик 2 – 2, 5 см.
Срок хранения среды – не более 5 сут при температуре (4±1)°С.
11.3.59 Агар с мочевиной (Кристенсена)
Основа среды: 1 г пептона, 1 г глюкозы, 5 г натрия хлористого (хлорид), 2 г калия фосфорнокислого двузамещенного, 0, 012 г фенолового красного, 15 г агара растворяют в 1000 см3 кипящей дистиллированной воды. Устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации составлял (6, 9±0, 1) ед. рН при температуре (25±1)°С. Стерилизуют в течение 20 мин при температуре (121±1)°С.
Перед употреблением асептически к 1000 см3 основы среды добавляют 50 см3 раствора мочевины массовой концентрацией 20, 0% (11.3.33).
11.3.60 Среда Кларка для реакции Фогес-Проскауэра
7 г бактериологического пептона, 5 г гидрофосфата калия безводного, 5 г глюкозы растворяют в 1000 см3 дистиллированной воды. Кипятят в течение 2 – 3 мин, фильтруют через ватно-марлевый или бумажный фильтр, устанавливают рН (6, 9 – 7, 0) ед. рН, разливают в пробирки, стерилизуют в течение 20 мин при температуре (115±1)°С.
Срок хранения среды – не более 28 сут при температуре (4±1)°С.
11.3.61 Среда для расщепления фенилаланина
В 1000 см3 дистиллированной воды при нагревании растворяют 15 см3 дрожжевого экстракта (11.3.23), 2, 0 г DL-фенилаланина или 1 г L-фенилаланина, 1 г фосфорнокислого двузамещенного натрия, 5 г хлористого натрия (хлорид), 12 г агара.
По 5 см3 среды разливают в пробирки, стерилизуют в течение 10 мин при температуре (121±1)°С и дают застыть в наклонном положении.
11.3.62 Среды с аминокислотами (лизином, орнитином, аргинином)
5 г одной из L-аминокислот или 10 г одной из DL-аминокислот, 3 г дрожжевого экстракта (11.3.23), 1 г глюкозы, 0, 012 г бромкрезолового пурпурного растворяют в 1000 см3 кипящей дистиллированной воды. Устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (6, 8±0, 1) ед. рН при температуре (25±1)°С.
Среды разливают в агглютинационные пробирки. Стерилизуют в течение 10 мин при температуре (121±1)°С или в течение 30 мин при температуре (110±1) С.
Цвет сред – светло-фиолетовый. Хранению среды не подлежат.
11.3.63 Агар полужидкий
3 г мясного экстракта, 5 г пептона бактериологического, 4 – 9 г агара микробиологического растворяют при нагревании до кипения в 1000 см3 дистиллированной воды. Устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (7, 0±0, 1) ед. рН при температуре (25±1)°С. Разливают в пробирки и стерилизуют в течение 20 мин при температуре (121±1)°С.
Срок хранения – не более 28 сут при температуре (4±1)°С.
11.3.64 Солевой бульон
К 100 см3 мясо-пептонного бульона (11.3.38) добавляют 6, 5 г натрия хлористого. Стерилизуют в течение 20 мин при температуре (121±1)°С.
11.3.65 Агар желточно-солевой
К 1000 см3 солевого бульона (11.3.64) добавляют 20 г микробиологического агара, расплавляют на водяной бане, при необходимости фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают мерным цилиндром по 100 см3 в колбы вместимостью 250 см3 и стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение 30 мин. Получают солевой агар. Вместо солевого бульона можно использовать как основу мясо-пептонный бульон (11.3.38), бульон Хоттингера по ГОСТ 10444.1, добавляя 65 г натрия хлористого.
К 1000 см3 стерильного, расплавленного и остуженного до температуры (45±1)°С солевого агара добавляют 200 см3 желточной эмульсии (11.3.24). После тщательного размешивания, желточно-солевой агар разливают в стерильные чашки Петри по 20 – 25 см3.
Срок хранения – не более 5 сут при температуре (4±1)°С.
11.3.66 Агар яично-желточный азидный
В 1000 см3 дистиллированной воды растворяют при нагревании 10 г пептона, 3 г натрия хлористого, 0, 2 г натрия фосфорнокислого двузамещенного, 15 г агара микробиологического, 5, 5 г мясного экстракта. При отсутствии мясного экстракта используют мясную воду (11.3.37), при этом все компоненты растворяют в 1000 см3 мясной воды. Устанавливают рН (7, 6±0, 1) ед. рН. Стерилизуют в течение 30 мин при температуре (121±1)°С, охлаждают до температуры 50°С – 60°С, добавляют 0, 15 г азида натрия, смешивают, вновь стерилизуют в течение 30 мин при температуре (121±1)°С. После охлаждения до температуры (50±1)°С, добавляют 150 см3 желточной эмульсии (11.3.24), смешивают и разливают в чашки Петри.
11.3.67 Желатиновая среда
10 – 15 г измельченного пищевого желатина добавляют в 100 см3 мясо-пептонного бульона (11.3.38), растворяют при помешивании и медленном нагревании в водяной бане при температуре 40°С – 50°С. После полного растворения устанавливают рН (7, 1 – 7, 3) ед. рН. Фильтруют через ватно-марлевый или бумажный фильтр, разливают в пробирки по 5 – 7 см3, стерилизуют текучим паром один раз в день по 20 мин два дня подряд.
После стерилизации среду охлаждают при строго вертикальном положении пробирок.
11.3.68 Среда Вильсон-Блера (агаризованная), измененная для анаэробов
К 1000 см3 стерильно расплавленного и охлажденного до температуры (80±1)°С питательного агара добавляют 10 см3 раствора натрия сернистокислого (сульфита) массовой концентрацией 100 г/дм3, предварительно приготовленного следующим образом: 100 г натрия сернокислого (сульфита) помещают в стерильную колбу объемом 1000 см3 и добавляют до метки 1000 см3 стерильную дистиллированную воду; и 1 см3 раствора железа (III) аммония сульфата массовой концентрацией 50 г/дм3, предварительно приготовленного следующим образом: 50 г железа (III) аммония сульфата помещают в стерильную колбу объемом 1000 см3 и добавляют до метки 1000 см3 стерильную дистиллированную воду.
Срок хранения среды в защищенном от света месте при температуре (4±1)°С – не более 7 сут.
Допускается приготовление среды Вильсон-Блера следующим образом: к 100 см3 расплавленного питательного агара добавляют 4 см3 раствора натрия сернистокислого (сульфита) массовой концентрацией 100 г/дм3 и 1 см3 раствора железа треххлористого 6-водного массовой концентрацией 80 г/дм3, предварительно приготовленного следующим образом: 80 г железа треххлористого 6-водного помещают в стерильную колбу объемом 1000 см3 и добавляют до метки 1000 см3 стерильную дистиллированную воду.
Готовая среда хранению не подлежит.
11.3.69 Среда железосульфитная
К 1000 см3 дистиллированной воды добавляют 10 г триптона, 0, 5 г сульфита натрия, 0, 5 г железа (III) цитрата, 15 г агара (при приготовлении агаризованной среды) или 1, 5 г агара (при приготовлении вязкой среды). Компоненты растворяют при нагревании, после чего охлаждают до температуры (50±5)°С. Устанавливают рН (7, 1±0, 1) ед. рН. Среду разливают в пробирки по 10 – 12 см3 и стерилизуют в течение 15 мин при температуре (121±1)°С.
Триптон может быть заменен на равноценную навеску сухого панкреатического гидролизата казеина или на десятикратный объем жидкого панкреатического гидролизата казеина. Триптон и 1000 см3 дистиллированной воды могут быть заменены на 1000 см3 мясной воды (11.3.37).
11.3.70 Среда Китт-Тароцци
Среду Китт-Тароцци готовят по ГОСТ 10444.1 со следующим дополнением: перед употреблением среду регенерируют. Для этого пробирки со средой помещают в водяную баню и прогревают в течение 20 мин при температуре (100±1)°С. Затем пробирки со средой быстро охлаждают водопроводной водой.
11.3.71 Селенитовая среда Лейфсона
Для приготовления среды готовят два раствора: А и Б.
Раствор А: 5 г пептона бактериологического, 7 г натрия фосфорнокислого двузамещенного безводного, 3 г натрия фосфорнокислого однозамещенного, 4 г химически чистой лактозы, 1000 см3 дистиллированной воды, рН (7, 0±0, 1) ед. рН, смешивают, разливают в стерильную посуду по 225 см3 и стерилизуют текучим паром один раз вдень по 30 мин два дня подряд или при температуре (112±1)°С в течение 30 мин однократно.
Раствор Б: раствор натрия кислого селенистокислого с массовой концентрацией 10% (11.3.21), (готовят на стерильной дистиллированной воде перед употреблением).
Перед началом работы к 225 см3 раствора А стерильно добавляют 9 см3 раствора Б.
11.3.72 Приготовление чашек со средой
Колбу с приготовленной и стерилизованной питательной средой после прогрева среды помещают в водяную баню при температуре от 44°С до 47°С, перемешивают, разливают в стерильные чашки Петри, дают затвердеть и подсушивают с открытой крышкой, соблюдая правила стерильности, пока поверхность среды не будет сухой.
Перед использованием среду в чашках предпочтительно с открытой крышкой и поверхностью среды вниз подсушивают в шкафу с температурой от 37°С до 55°С до тех пор, пока поверхность среды не будет сухой.
Срок хранения чашки со средой при температуре (4±1)°С – не более 5 сут.
11.3.73 Среда из сухого питательного агара: готовят по инструкции изготовителя.
11.3.74 Среда из сухого питательного агара с глюкозой
В 975 см3 сухого питательного агара (11.3.74) непосредственно перед применением асептически добавляют 25 см3 стерильного раствора глюкозы массовой концентрации г/дм3, предварительно приготовленного следующим образом: 200 г глюкозы помещают в стерильную колбу объемом 1000 см3 и добавляют до метки 1000 см3 стерильную дистиллированную воду.
11.3.75 Пептонно-буферная среда
10 г пептона, 0, 45 г калия фосфорнокислого однозамещенного, 5, 34 г натрия фосфорнокислого двузамещенного растворяют в 1000 см3 кипящей дистиллированной воды. Разливают в колбы вместимостью 500 см3 по 225 см3 среды. Стерилизуют (20±1) мин при температуре (121±)°С, рН среды при температуре (25±1)°С составляет (7, 0±0, 1) ед. рН. Хранение при комнатной температуре не более 14 сут.
11.3.76 Бульон лактозный с бриллиантовым зеленым и желчью
10 г пептона, 10 г лактозы, 20 г сухой говяжьей желчи или 200 см3 натуральной желчи, 2, 66 см3 раствора бриллиантового зеленого, приготовленного по 11.3.15, добавляют к 1000 см3 дистиллированной воды, перемешивают, нагревают на слабом огне до кипения, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, охлаждают до температуры (50±1)°С, устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он составил (7, 2±0, 1) ед. рН при температуре (25±1)°С. Разливают по 10 см3 в пробирки с поплавками, стерилизуют (15±1) мин при температуре (121±1)°С.
Хранят не более 14 сут при температуре (4±1)°С.
11.3.77 Приготовление пробирок со скошенным столбиком среды
11.3.77.1 Приготовленную стерильную питательную среду (например, при приготовлении скошенного столбика агара с цитратом Симмонса или скошенного столбика мясо-пептонного агара) после прогрева в водяной бане при температуре от 44°С до 47°С перемешивают и по 5 – 7 см3 разливают, соблюдая правила стерильности в стерильные пробирки, скашивают, оставляя столбик высотой 2, 0 – 2, 5 см, после чего среде дают затвердеть.
Срок хранения пробирок со средой при температуре (4±1)°С – не более 5 сут.
11.3.77.2 Приготовленную нестерильную питательную среду (например, при приготовлении скошенного столбика мясо-пептонного агара) разливают в пробирки по 5 – 7 см3, пробирки со средой стерилизуют и после остывания среды до температуры от 44°С до 47°С скашивают, оставляя столбик высотой 2, 0 – 2, 5 см, после чего среде дают затвердеть.
Срок хранения пробирок со средой при температуре (4±1)°С – не более 1 мес.
11.3.78 Приготовление сухих (дегидратированных) питательных сред проводят по инструкции на этикетке упаковки.
11.3.79 Приготовленные растворы реактивов, если не установлено иначе, хранят во флаконах из темного стекла с притертой пробкой в холодильнике при температуре (4±1)°С не более 3 мес или при температуре от 18°С до 23°С – не более 1 мес.
11.3.80 Приготовленные и стерилизованные питательные среды, разлитые в колбы, пробирки, чашки Петри, если не установлено иначе, хранят в холодильнике при температуре (4±1)°С не более 3 мес.
Перед использованием, если не установлено иначе, питательные среды доводят до температуры окружающей среды.
11.3.81 Контроль питательных сред – по ГОСТ ISO/TS 11133-1.
11.3.82 Сроки и условия хранения питательных сред – по ГОСТ ISO/TS 11133-1.
* В Российской Федерации действует ГОСТ Р 54731-2011 “Дрожжи хлебопекарные прессованные. Технические условия”.
** Данная информация является рекомендуемой, приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не исключает возможность использования другой аппаратуры с аналогичными свойствами.
*** В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 6887-2-2013 “Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка проб, исходной суспензии и десятикратных разведений для микробиологических исследований. Часть 2. Специальные правила подготовки мяса и мясных продуктов”.
2 Оборудование, средства измерения и материалы
Морозильная камера для хранения образцов при температуре не выше минус 18°C.
Холодильник для размораживания образцов при температуре не выше 6°C.
Весы лабораторные по ГОСТ 24104 среднего класса точности с пределом взвешивания 2 кг.
Бумага фильтровальная или бумажные салфетки.
Эксикаторы 2-250 по ГОСТ 25336 или другая емкость с крышкой и вкладышем с отверстиями для стекания жидкости.
Термометр жидкостный стеклянный частичного погружения по ГОСТ 28498 второго класса точности с ценой деления шкалы 0,2°C, обеспечивающий измерение температуры (4,0±0,5)°C.
Допускается использование другого оборудования и средств измерения с метрологическими характеристиками не ниже указанных.
6 Метод смыва ополаскиванием со всей поверхности продукта
6.1 Метод смыва ополаскиванием применяют для потрошеных тушек птицы, частей тушки, полученных в результате разделки потрошеной тушки, массой не более 1, 5 кг, кусковых непанированных натуральных полуфабрикатов из мяса птицы и субпродуктов птицы.
Смыв проводят со всей поверхности продукта стерильной жидкостью – физиологическим раствором, водопроводной водой и другими разбавителями.
Отбор проб методом смыва (ополаскивания) всей поверхности проводят без обжига поверхности пробы продукта.
6.2 Отбор лабораторных проб проводят из выборки по нормативным документам на конкретную продукцию (на мясо индеек – ГОСТ 31473, мясо кур – ГОСТ 31962, мясо уток – ГОСТ 31990, мясо птицы механической обвалки – ГОСТ 31490, субпродукты птицы – ГОСТ 31657, полуфабрикаты из мяса птицы и субпродуктов птицы – ГОСТ 31936 и по документу государства, принявшего стандарт), но не менее чем с трех тушек или пяти частей тушек птицы.
Тушку птицы или ее часть, находящуюся на линии (конвейере), в перчатках помещают в одноразовый пакет. Размер пакета должен соответствовать предполагаемой массе тушки или ее части с учетом объема жидкости для смыва.
Прежде чем тушку или ее часть поместить в пакет, следует дождаться отекания с нее избытка воды. В случае если это невозможно, то тушку или ее часть, соблюдая правила асептики, перемещают с подвески конвейера на отдельные продезинфицированные подвески и оставляют до полного отекания воды, после чего помещают в пакет.
Освободив ноги тушки с подвески, тушку в пакете снимают с конвейера. Пакет с тушкой или ее частью закрывают, взвешивают, помещают на ровную поверхность, придерживая верх пакета, приоткрывают его и наливают во внутреннюю полость тушки и на поверхность тушки или ее части жидкость для смыва. Соотношение массы тушки или ее части к объему жидкости для смыва 1:1.
Допускается использовать жидкость для смыва в объеме, равном половине массы образца. Результаты количественных определений микроорганизмов, полученные при посеве 1 см3 смывной жидкости, в таком случае должны делиться на 2. В случае использования другого объема жидкости для проведения смыва (ополаскивания) результаты количественных определений микроорганизмов в 1 см3 смывной жидкости следует делить на коэффициент пересчета объема жидкости, используемой для смыва, к массе образца, при этом объем используемой жидкости должен быть достаточным для гарантированного ополаскивания всей поверхности образца.
Из пакета удаляют избыток воздуха и закрывают. Пакет с содержимым встряхивают в течение 1 мин, аккуратно держа его одной рукой за днище, другой за верх, затем переворачивают круговыми движениями для более тщательного ополаскивания внутренней и внешней поверхности тушки или ее части. Пакет ставят на ровную поверхность и, придерживая его за тушку или ее часть, открывают. Из пакета рукой в одноразовой перчатке или стерильным пинцетом, медицинским зажимом достают тушку или ее часть, избегая чрезмерного отекания жидкости в пакет. Пакет со смывной жидкостью плотно закрывают. Допускается смывную жидкость, соблюдая правила асептики, переносить из пакета в стерильный контейнер с плотной крышкой для доставки в лабораторию.
6.3 Отбор проб кусковых непанированных натуральных полуфабрикатов или обработанных субпродуктов для смывов проводят, соблюдая правила асептики, без обжига поверхности пробы.
Общая масса объединенной лабораторной пробы одного наименования (для кускового мяса или обработанных субпродуктов) должна быть не менее 300 г. Пробу помещают в пакет или в предварительно взвешенный контейнер (флакон), соблюдая правила асептики. Далее следуют процедурам по 6.2.
6.4 Полученная смывная жидкость служит исходным материалом для последующих 10-кратных разведений.
6.5 Определение КМАФАнМ, БГКП и других условно-патогенных микроорганизмов проводят в 1 см3 смывной жидкости.
6.6 Выявление патогенных микроорганизмов (например, сальмонелл, листерий) в пробах смывов проводят в 25 см3 смывной жидкости.
Правила отбора проб клинического материала для бактериологических исследований
Разнообразие материала и своеобразие микрофлоры отдельных тканей требует применения определенных методических приемов отбора проб.
В случае хранения материала в холодильнике срок хранения можно увеличить до 3-4 часов (это не относится к пробам крови и ликвора). Пренебрежение срока¬ми доставки материала приводит к искажению результатов исследования. Использование транспортных сред удлиняет сроки хранения материала до 24-48 ч.
1 Сущность метода
Сущность метода заключается в измерении массы жидкости (воды и мясного сока), выделившейся при оттаивании замороженного образца в течение времени, необходимого для достижения температуры в толще продукта 4 X.
8 Метод вырезания (иссечения) кусочков тканей
8.1 Общие положения
Отбор проб методом вырезания (иссечения) кусочков тканей из глубины продукта проводят не менее чем от трех тушек или пяти частей тушек.
Зоны для отбора проб выбирают в зависимости от поставленной задачи и конкретных методов испытаний.
Отбор проб проводят только после обжига поверхности, используя оборудование для обжига (например, портативную газовую горелку или подожженный ватно-марлевый тампон, смоченный этиловым спиртом).
В случае если продукт упакован в потребительскую тару, упаковку предварительно протирают этиловым спиртом и вскрывают с помощью стерильных ножниц и скальпеля. Продукт извлекают из упаковки, соблюдая правила асептики, и помещают горизонтально в стерильный лоток анализируемой поверхностью к верху.
Поверхность образца обжигают, удаляют поверхностный слой площадью приблизительно 4×4 см и толщиной 1 см. Из этого участка, используя стерильные скальпель и пинцет, вырезают кусочки ткани на всю глубину мышцы, не касаясь нижней части мышцы.
Для формирования объединенной пробы из попавших в выборку проб продукта одного наименования вырезают точечные пробы приблизительно в равных количествах и помещают в стерильный контейнер или пакет.
Объединенная проба должна составлять не менее 300 г съедобной части.
8.2 Отбор проб из тушки или части тушки
8.2.1 Тушку или часть тушки (полутушка, грудка, половина грудки), попавшей в выборку, помещают на стерильный лоток: тушку – спинкой вниз, а части тушек – кожей вверх. Кожу грудки или открытый участок грудной мышцы обжигают. Обожженный участок удаляют, используя стерильные скальпель и пинцет. Не касаясь нижней части мышцы, с глубины вырезают кусочки ткани. Пробу помещают в стерильный контейнер или пакет и направляют в лабораторию.
8.2.2 Отбор проб кусочков ткани от других частей тушек, попавших в выборку, проводят по 8.1.
8.2.3 Отбор проб кускового мяса, мяса птицы механической обвалки, пищевых субпродуктов птицы, полуфабрикатов из мяса птицы и пищевых субпродуктов, пищевого жира-сырца птицы, коллагенсодержащего сырья проводят от партии каждого наименования. Из разных мест, соблюдая правила асептики, отбирают не менее трех точечных проб по 10 – 50 г по 8.1 и 8.2.1.
8.2.4 Точечные пробы охлажденного мяса птицы механической обвалки (МПМО) отбирают не менее чем из трех мест на разной глубине куска или блока. Масса объединенной пробы должна быть не менее 1000 г. При отборе проб от замороженного в блоках МПМО необходимо учитывать, что поверхностные слои МПМО подвержены более быстрой порче, чем внутренние. Поэтому для получения представительной пробы ее отбирают вырезанием куска МПМО на всю толщину блока так, чтобы величина отношения площади отрезанной поверхности блока к объему пробы равнялась величине отношения площади поверхности всего блока к его объему. В случае блока прямоугольной формы от середины боковой поверхности и перпендикулярно ей вырезают кусок прямоугольной формы, содержащий часть верхней, нижней и одной боковой поверхности блока. Длину L, см, разреза перпендикулярно боковой поверхности вычисляют по формуле:
где а и b – длина и ширина блока МПМО, см.
Точечные пробы отбирают не менее чем от двух блоков МПМО. Масса объединенной пробы МПМО должна быть не менее 1000 г. В случае значительной неоднородности состояния поверхности МПМО количество отбираемых точечных проб увеличивают.
8.2.5 Субпродукты из групповой упаковки отбирают в виде трех точечных проб из разных мест каждой из двух или более единиц групповой упаковки, попавших в выборку. Масса объединенной пробы каждого наименования должна быть не менее 1000 г.
8.2.6 Точечные пробы жира-сырца, субпродуктов, содержащих кости, коллагенсодержащего сырья отбирают с учетом содержания в них съедобной части, общая масса которой в объединенной пробе должна быть не меньше 300 г (головы, ноги) или 600 г (шеи). Из каждой попавшей в выборку транспортной упаковки субпродуктов, жира-сырца, коллагенсодержащего сырья случайным образом отбирают одну единицу потребительской упаковки. Если масса продуктов в одной потребительской упаковки не превышает 1000 г, то не менее трех отобранных единиц потребительской упаковки с субпродуктами или жиром-сырцом, или коллагенсодержащего сырья целиком направляют в лабораторию.
Общая масса точечных проб жира-сырца должна быть не менее 300 г.
Отбор точечных проб субпродуктов или жира-сырца проводят ложкой, половником, пинцетом или другим инструментом, в зависимости от вида субпродукта.
8.2.7 Отбор проб кожи с тушки или части тушки проводят по документу, действующему на территории государства, принявшего стандарт.
8.2.8 Пробы исследуют на определение КМАФАнМ в 1 г продукта, а также другие виды микроорганизмов (например, сальмонелл, листерий) в 25 г продукта.
“Правила взятия патологического материала, крови, кормов и пересылки их для лабораторного исследования”
(утв. Минсельхозом СССР 24.06.1971) Источник публикации
“Ветеринарное законодательство. Том II”. М., “Колос”, 1972 Примечание к документу
Утверждены Главным управлением ветеринарии Министерства
сельского хозяйства СССР 24 июня 1971 года Взамен Правил, утвержденных
4 июля 1958 года